Гепатопротекторные свойства концентрата полифенолов винограда Эноант при экспериментальных поражениях печени алкоголем

Гепатопротекторные свойства концентрата полифенолов винограда Эноант при экспериментальных поражениях печени алкоголем

УДК 616.36+616.89-008-08:663.252.6 © А.Н. Захарова , 2004.

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА КОНЦЕНТРАТА

ПОЛИФЕНОЛОВ ВИНОГРАДА «Эноант» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЯХ ПЕЧЕНИ АЛКОГОЛЕМ

А.Н.Захарова f

Кафедра судебной медицины (зав. - проф. А.А. Бабанин), кафедра общей и биоорганической химии зав. -проф.), кафедра патологической анатомии (зав. - проф.) Крымского медицинского университета им. СИ. Георгиевского, г. Симферополь.

HEPATOPROTECTIVE PROPERTIES OF POLYPHENOLS DERIVED FROM GRAPE AT EXPERIMENTAL

AFFECT OF LIVER BY ALCOHOL A.N. Zacharova

SUMMARY

This article shows the results of morphological and biochemical investigations in state of liver cells at the effect of alcohols and grape flavonoids on the base of chronical alcohol intoxication. In experimental investigations to study the state of free-radical oxidation processes and shows the hepatoprotective action of grape flavonoids.



Одной из важнейших проблем здравоохранения является рост числа хронических заболеваний печени. В частности, за последние пять лет заболеваемость на Украине хроническим гепатитом выросла на 76.6%, желчекаменной болезнью в 2 раза. Успехи гепатоло-гии, достигнутые за последние годы, заставили пересмотреть и уточнить многие вопросы этиологии и патогенеза болезней печени, а также подходы к лечению.

Алкоголь вызывает различные формы поражений печени: от алкогольной жировой инфильтрации печени до алкогольного цирроза печени [2,4,9].

В последние годы обсуждается роль воздействия токсических продуктов, образующихся в ходе сво-боднорадикального окисления (СРО), в развитии патологических состояний. Полагают, что активные формы кислорода (АФК), являющиеся высокореакционными частицами, образуются при длительном действии алкоголя. В этом случае, помимо обычной системы биотрансформации этанола (алкогольдегидрогеназа > альдегиддегидрогеназа) подключается система мик-росомального окисления этанола, являющаяся источником АФК.

В свою очередь, острое, а также хроническое алкогольное отравление, вызывает повышение кишечной проницаемости. Это способствует абсорбции из

тонкого кишечника эндотоксина, который может играть важную роль в повреждении печени цитокинами и супероксидными анионами (супероксид анион-радикал О2~, перекись водорода Н2О2, гидроксил радикал ОН) [11].

Среди многочисленных лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии алкогольных заболеваний печени, выделяют сравнительно небольшую группу гепатопротекторов, повышающих устойчивость печени к действию патогенных факторов, нормализующих функциональную активность и репаратив-но-генераторные процессы. В настоящее время поиск и оценка эффективности указанной группы препаратов является весьма актуальной задачей [10].

Целью настоящего исследования является комплексное биохимическое и морфологическое изучение эффективности гепатопротекторных свойств безалкогольного пищевого концентрата полифенолов винограда «Эноант».

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В работе использована модель алкогольного поражения печени у крыс. Степень поражения печени на разных стадиях алкогольной интоксикации изучали морфологически и морфометрически, затем эти данные сопоставлялись с результатами биохимических исследований.



































Опыты проведены на 60 нелинейных крысах (средняя масса 200-230 г), разделенных на 3 серии по 20 животных в каждой серии. 1-я серия - интактные животные (контроль). Животным 2-й серии в течение 90 дней вводили в желудок 40% этанол, в расчете 0.016 мл 40%-ного этанола на 1 г массы тела. Животным 3-ей серии после 90-дневной алкогольной интоксикации через зонд вводили в течение 21 дня концентрат «Эноант» в дозе 0.25 мл на килограмм массы [6].

Для оценки интенсивности процессов СРО липидов, определяли содержание коньюгарован-ных диенов (КД) и диенкетонов (ДК) по методике Стальной И.Д. в модификации Казакова К.С. и Сидоровой Л.Л. [7,8]. Уровень карбонильных продуктов ПОЛ, активных по отношению к 2-тиобарбитуровой кислоте, определяли при помощи диагностических наборов ТЕК-Агат по методике Mihara M. [12]. Изучение спонтанной окислительной модификации белков сыворотки крови проводили методом Левина в модификации Дубининой Е.Е. [3,13], содержание молекул средней массы определяли по методу Габриэлян Н.И. в модификации Брасюк Д.Л. [1]. Состояние антиоксидантной системы определяли по активности фермента каталазы в сыворотке крови [5]. Полученные данные обрабатывались статистически методом дисперсионного анализа.




РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В результате морфологического исследования установлено, что наиболее характерными видами алкогольных повреждений печени у крыс являются три группы изменений разной интенсивности и объема: а) дисциркуля-торные (гиперемия синусоидов и портальных б) альтеративные в виде жировой и (или) гид-ропической дистрофии гепатоцитов; в) воспалительные (мононуклеарные инфильтраты портальных трактов и перипортальной области). Эти процессы достигают максимума через 90 дней алкогольной интоксикации (серия 2) и значительно ослабевают или полностью исчезают после отмены алкогольной нагрузки и, особенно, в случае применения «Эно-анта» в течение 21 дня (серия 3).

Для количественной характеристики степени тяжести и объема алкогольных поражений печени в сравниваемых сериях определяли в случайно выбранных полях зрения микроскопа (не менее пятнадцати в трех срезах при увеличении xl 00) тип алкогольного повреждения и условную степень тяжести каждого из них в каждом наблюдении. За нулевую степень принимали полное отсутствие того или иного вида повреждения. К первой степени (слабовыра-












женные изменения) относили те случаи, в которых дистрофические изменения ограничивались отдельными очагами вакуолизации в единичных полях зрения, а портальные инфильтраты встречались не более одного в некоторых полях зрения; при этом дисциркуляторные изменения заключались только или преимущественно в полнокровии междольковых вен (но не синусоидов). Вторая степень (умеренные и значительно выраженные изменения) характеризуются диффузной вакуолизацией гепатоци-тов в большей части долек или во всех дольках в поле зрения (рис. 1), наличием портальных инфильтратов в каждом поле зрения (рис.2), а также диффузной гиперемией синусоидов и междольковых сосудов (рис.3).

В сравниваемых сериях (см.выше) подсчитывали количество животных с одинаковой степенью тяжести того или иного типа повреждений. Полученные цифровые данные (см. табл. 1) позволяют с достаточной вероятностью (р < 0.05) утверждать, что под влиянием концентрата «Эноант» существенно уменьшается тяжесть алкогольных повреждений печени всех 3-х типов: дисциркуляторных, альтеративных, воспалительных (рис. 4).

Результаты проведенных нами биохимических исследований во всех соответствующих сериях эксперимента показывают повышение уровня первичных и вторичных продуктов ли-попероксидации (коньюгированные диены, ди-енкетоны и малоновый диальдегид) в результате 90-дневной алкоголизации. Однако, применение концентрата «Эноант», в качестве гепатоп-ротерного препарата, приводит к достоверному снижению содержания продуктов липоперокси-дации, о чем свидетельствует представленные графики.

Повышенному содержанию продуктов ли-попероксидации сопутствовало увеличение окислительной модификации белков (ОМБ) (рис.7) и содержания пептидов средней массы (ПСМ) (рис. 8), применение же «Эноанта» явилось фактором, существенно снижающим содержание токсичных продуктов окислительных процессов (рис.7, 8).

В клетках существуют естественные механизмы утилизации как АФК, так и продуктов окисления, одним из которых является катала-за - фермент антиоксидантной системы организма.

При действии факторов токсического поражения печени содержание каталазы увеличивается, что свидетельствует об активации данного фермента, в то время как применение концентрата «Эноант» нормализовало содержание фермента в сыворотке крови.



Таким образом, полученные экспериментальные данные показывают, что усиление процессов свобод-норадикального окисления (СРО), обнаруженное в ходе биохимических исследований, является одной из причин вызываемых алкоголем повреждений и сопровождается накоплением в печени и крови высокотоксичных продуктов перекисных процессов. Это снижает функциональные возможности печени, т.к. образующиеся токсичные метаболиты приводят к повреждению фосфолипидов мембран, нарушению структуры белков, скоплению триглицеридов внутри гепато-цитов, приводящих к патологическим изменениям в функционировании гепатоцитов и развитию фиброза, что подтверждается как биохимическими, так и морфологическими исследованиями.

Однако, применение концентрата „Эноант" приводило к существенному снижению биохимических показателей, являющихся маркерами окислительного стресса, что свидетельствует об уменьшении интенсификации свободнорадикальных процессов, а также к уменьшению степени тяжести повреждений печени, полученных в морфологических исследованиях.

i ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты биохимических и морфологических исследований показывают, что повышение уровня продуктов свободно-радикального окисления в сыворотке крови крыс в условиях алкогольной интоксикации сопровождается альтеративными, воспалительными и дисциркуляторными поражениями печени, достигающими наибольшей степени тяжести к 90-му дню опыта.

Напротив, использование концентрата «Эноант» в течение 21-го дня после прекращения алкоголизации, приводит к существенному, статистически значимому снижению уровня маркеров окислительного стресса, т.е. уменьшению интенсивности свободно-радикальных процессов. Параллельно увеличивается в несколько раз число животных, не имеющих морфологических признаков алкогольных изменений печени (17,11 и 8 против 1,3 и 2 /см.табл./) и уменьшается количество крыс с тяжелыми повреждениями (отсутствие повреждений, 4 и 3, вместо 12,15 и 11).

Наиболее выраженный благоприятный эффект сказывается на дисциркуляторных и альтеративных алкогольных повреждениях; менее заметно влияние препарата на воспалительные изменения, которые перси-стируют у 12 животных из 20. Это свидетельсвует о достаточно высокой эффективности «Эноанта» для применения в качестве гепатопротектора.

ЛИТЕРАТУРА

1. Габриэлян Н.И., Липатова В.И. Опыт исполь зования показателя средних молекул в крови для ди агностики нефрологических заболеваний у детей // Лаб.дело.-1984.-№3.-С. 138-140.

2. Григорьев П.Я., Яковенко И.Н. Алкогольная болезнь печени //Московский мед. журнал.-1998.-№ 5.-С. 13-15.

3. Дубинина Е.Е., Бурмистров CO., Ходов Д.А., Поротов И.Г. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод ее определения // Вопр. мед. химии. - 1995.-№ 1.-С. 24-26.

4. Калинин А.В. Вопросы патогенеза, клиники и лечения алкогольной болезни печени// Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. -2001. -№4. -С. 8-14.

5. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности катала- зы//Лаб. дело. - 1988.-№ 1. - С.16-18.

6. Мешков В.В., Богданов Н.Н., Богданов А.Н. Экспериментальные предпосылки к оптимизации ме тодик применения «Эноанта» //Вестник физиотерапии

; и курортологии. - 2002. - № 2. - С. 30-33.

7. Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977.-С. 62-64.

8. Убайдуллаев A.M., Казаков К.С., Мукимов Д.М., Махмудов Б.А. Лабораторный контроль генетических особенностей воспаления и эффективности лечения при хроническом бронхите //Клиническая лаборатор ная диагностика. -1994.-№ 3. - С. 24-28.

9. Харченко Н.В., Радонежская Е.В. Современные взгляды на проблему алкогольной болезни печени // Сучаснагастроентеролог1я. АМНУ. -2004. -№4(18), -С. 5-12.



10. Чекман I.C. Флавоно'цщ: клшко-фармаколог- 1чний аспект// Фгготерашя в Укршш.-2000.- № 2.- С. 3-5.

11. Abittan Ch., Lieber Ch.S. Alcohol liver diasease //Clin. Perspect. Gastroenterol. -1999. -Sept.-Oct. - P. 257-263.

12. Levine R. L, Garland D., Oliver С N. et al. Meth. Enzymol. - 1990. - V. 186. - P. 464-478.

13. Mihara M., Uchiyama M. et al. // Biochem. Med. - 1980.-V. 23.-P. 302.